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            大鼠白介素1β ELISA試劑盒操作步驟

            更新時(shí)間:2021-09-14    點(diǎn)擊次數(shù):1397
            大鼠白介素1β ELISA試劑盒操作步驟
            1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
            40 ng/L
            5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            20 ng/L
            4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            10 ng/L
            3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            5 ng/L
            2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
            2.5 ng/L
            1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
            150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
             
             
            2.    加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
            3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
            4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
            5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
            6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
            7.         溫育:操作同3。
            8.         洗滌:操作同5。
            9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
            10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
            11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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