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            影響elisa試劑盒測(cè)定成果的原因和解決辦法

            更新時(shí)間:2022-02-21    點(diǎn)擊次數(shù):1558

              影響elisa試劑盒測(cè)定成果的原因和解決辦法

             

              ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定,具有靈敏度高,操作簡(jiǎn)略等優(yōu)點(diǎn),但是在詳細(xì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中影響要素較多,而且要按照嚴(yán)厲的闡明要求,在臨床檢驗(yàn)中除正常反響外,有時(shí)常可見(jiàn)到些錯(cuò)誤成果(即假陽(yáng)性或假陰性成果)。

              影響ELISA測(cè)定錯(cuò)誤成果的原因主要有:

              ①標(biāo)本要素;

              ②試劑要素;

              ③操作要素。

              類(lèi)風(fēng)濕因子

              人血清中IgM、IgG型類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號(hào)二抗的FC段直接結(jié)合,然后導(dǎo)致假陽(yáng)性。

              解決辦法:

              1.用F(ab)2替代完好的IgG;

              2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有用);

              3.檢測(cè)抗原時(shí),能夠用2-巰基yi醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。

              二、補(bǔ)體

              ELISA系統(tǒng)中固相抗和符號(hào)二抗過(guò)程中,抗體分子發(fā)作變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái),使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來(lái),然后形成假陽(yáng)性。

              解決辦法:

              1.用EDTA稀釋標(biāo)本;

              2.用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。

              三、嗜異性抗體

              人類(lèi)血清中含有能與嚙齒類(lèi)動(dòng)物(如鼠等)Ig(s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中抗和二抗連接起來(lái),也能形成假陽(yáng)性。

              解決辦法:

              可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig(s),但加入量不足或亞類(lèi)不同時(shí)無(wú)效。

              四、嗜靶抗原的本身抗體

              抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定成果。

              解決辦法:

              測(cè)定需用理化方法將其解離后再測(cè)定

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